細胞凋亡(Apoptosis)是指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。作為細胞的一種基本生物學現象,細胞凋亡是機體為更好地適應生存環境,而主動爭取的一種死亡過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用,一般過程包括4個階段,即:誘導啟動、細胞內調控、實施和凋亡細胞的吞噬搬運。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型,而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。
細胞凋亡對胚胎發育及形態發生、組織內正常細胞群的穩定、機體的防御和免疫反應、疾病或中毒時引起的細胞損傷、老化、腫瘤的發生進展起著重要作用,并具有潛在的治療意義,一直是生物醫學研究的熱點。
除了傳統的凋亡細胞形態學檢測,細胞凋亡的檢測方法多種多樣,且根據凋亡早期和晚期的樣品,選擇不同的檢測手段。
檢測細胞凋亡的方法有流式檢測細胞凋亡(Annexin V/PI染色)和TUNNEL檢測細胞凋亡。
磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細胞膜的內側,但在細胞凋亡的早期(或細胞損傷時),PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。Annexin V是一種Ca2+依賴的磷脂結合蛋白,具有易于結合PS的特性,可充當敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。碘化丙啶(Propidine Iodide, PI)是一種核酸染料,不能透過完整的細胞膜,但能夠透過凋亡中晚期的細胞和死細胞的細胞膜,從而使細胞核染成紅色。將Annexin V和PI一起使用,可以將凋亡早期、晚期的細胞以及死細胞區分開來。
實驗流程:
1、細胞收集
2、細胞洗滌
3、細胞標記
4、流式細胞儀分析
5、結果判斷
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